近日，中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院煙草研究所煙草病蟲害防控創(chuàng)新團隊基于CRISPR/Cas13技術(shù)建立了番茄斑萎病毒檢測體系。研究通過RPA等溫擴增反應(yīng)與CRISPR/Cas13系統(tǒng)對RNA探針的附帶剪切功能，建立一種新的病毒檢測體系，可有效檢測茄科作物與傳毒介體薊馬中的番茄斑萎病毒。相關(guān)研究成果發(fā)表在《微生物學(xué)前沿（Frontiers in Microbiology）》上。

據(jù)楊金廣研究員介紹，番茄斑萎病毒（Tomato spotted wilt virus，TSWV）屬布尼亞病毒科（Bunyaviridae）番茄斑萎病毒屬（Tospoviruses）成員。由于其寄主范圍廣泛，危害嚴(yán)重，是世界10大最嚴(yán)重危害性植物病毒之一，在我國經(jīng)濟作物上發(fā)生嚴(yán)重，生產(chǎn)上迫切需要開發(fā)一種更加靈敏、快速的檢測方法。

CRISPR/Cas系統(tǒng)通常作為基因編輯工具，該團隊體外合成的活性Cas13a蛋白可與TSWV靶標(biāo)N基因crRNA特異性結(jié)合，構(gòu)建CRISPR/Cas13系統(tǒng)，通過該系統(tǒng)附帶剪切功能，剪切RPA反應(yīng)檢測體系中的RNA探針，基于熒光強度變化，實現(xiàn)病毒定量檢測目的。該技術(shù)體系對番茄和西花薊馬中TSWV檢測具有高度靈敏度和特異性，最低檢測TSWV拷貝數(shù)可達2.26×102?copies/μL，優(yōu)于實時熒光定量pcr技術(shù)，可實現(xiàn)單頭介體內(nèi)TSWV定量鑒定檢測，對于TSWV病毒病精準(zhǔn)預(yù)防具有重要實踐價值。

煙草所碩士研究生張萬紅和焦裕冰博士為論文第一作者，楊金廣研究員為論文通訊作者。該研究得到中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院科技創(chuàng)新工程、煙草綠色防控重大科技項目、云南省煙草公司科技計劃、四川省煙草公司科技計劃和河南省煙草公司洛陽市公司科技計劃等項目資助。